培养条件：气相环境：95%空气+5%二氧化碳；温度：37℃。培养基中添加10% fetal bovine serum (FBS) 和1%青霉素/链霉素（P/S）。该细胞系来自一位58岁白人男性肺癌患者的组织移植培养。A549细胞能够通过胞苷二磷酸胆碱途径合成高含量不饱和脂肪酸的卵磷脂。

传代方法：首次传代建议按1:2的比例进行。每两天更换培养液。为确保细胞的健康状况，建议同时购买多份细胞，享受优厚优惠。收到细胞后，处理至良好状态后，应灌满完全培养液并妥善封好瓶口，以确保运输安全。

收到细胞后，使用75%酒精对细胞瓶外壁进行消毒，然后在超净台内进行无菌操作。将细胞瓶置于37℃、5%二氧化碳的培养箱中静置3-4小时，以便稳定细胞状态后再进行后续处理。使用显微镜观察细胞生长情况，并拍摄不同放大倍数的照片进行保存（建议拍摄40x, 100x, 200x各一张），前三天的照片将作为重要的售后依据，如果未提供照片将默认收到的状态良好。

细胞培养步骤：
a. 细胞传代：当细胞汇合度未超过80%时，将完全培养液收集至离心管中，保留5ml完全培养基，放入37℃、5%二氧化碳孵箱中培养。若细胞密度已超过80%，则可进行传代培养。贴壁细胞的传代步骤如下：

1. 弃去培养上清，使用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 添加约1-2ml 0.25%胰蛋白酶消化液，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，同时观察细胞消化情况。若细胞大部分变圆并脱落，立即返回操作台，轻轻敲打培养瓶后加入5ml以上完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出，并将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM下离心5分钟，弃去上清液，并加入1-2ml完全培养基重悬。
4. 将细胞悬液按1:2的比例分瓶传代（分至两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5%二氧化碳的细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存：

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃去培养液，用PBS清洗细胞一次。
2. 添加约1ml 0.25%胰蛋白酶消化液，观察到细胞回缩变圆后立即加入5ml完全培养液终止消化，再轻轻吹打使细胞脱落。将悬液转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀细胞并加入1ml的无血清冻存液（如雅吉生物C7001），混匀后分装至冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，若需转入液氮罐，需在-80℃存放24小时以上再转入。

c. 细胞复苏：

1. 从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护装备），迅速放入37℃水浴中解冻，直至管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭管外壁。
2. 将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，用5ml完全培养基重悬，并接种至T25培养瓶中，置于37℃、5%二氧化碳培养箱中继续培养。
4. 第二天更换为新鲜完全培养基进行继续培养。

注意事项：有些细胞贴壁不牢，在运输过程中可能会发生细胞脱落，这是正常现象。如果脱落较多，可将培养液收集至离心管中，1000RPM离心5分钟，所获得上清可做过渡培养。沉淀后加入1-2ml胰酶，轻轻重悬并消化1-2分钟后，以5ml完全培养基终止反应。再离心并弃去上清，补加1-2ml完全培养基重悬，按1:2比例进行分瓶传代（分至两个T25瓶），加入新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5%二氧化碳的培养箱中培养。强调品牌尊龙凯时以确保培养质量和成功率。